凝膠成像即對DNA或RNA膠進(jìn)行切膠、拍照、觀察、分析的實(shí)驗(yàn)室類儀器,凝膠成像系統(tǒng)可以應(yīng)用于分子量計(jì)算、密度掃描、密度定量、PCR定量等生物工程常規(guī)研究。凝膠成像系統(tǒng)的基本骨包含:CCD相機(jī),暗室和分析軟件。
樣品在電泳凝膠或者其他載體上的遷移率不一樣,以標(biāo)準(zhǔn)品或者其他的替代標(biāo)準(zhǔn)品相比較就會(huì)對未知樣品作一個(gè)定性分析。這個(gè)就是圖像分析系統(tǒng)定性的基礎(chǔ)。根據(jù)未知樣品在圖譜中的位置可以對其作定性分析,就可以確定它的成份和性質(zhì)。
樣品對投射或者反射光有部分的吸收,從而照相所得到的圖像上面的樣品條帶的光密度就會(huì)有差異。光密度于樣品的濃度或者質(zhì)量成線性關(guān)系。根據(jù)未知樣品的光密度,通過于已知濃度的樣品條帶的光密度指相比較就可以得到未知樣品的濃度或者質(zhì)量。這就是圖像分析系統(tǒng)定量的基礎(chǔ)。采用紫外透射光源和白光透射光源使光的分布更加均勻,最大限度的消除了光密度不均造成的對結(jié)果的影響。
凝膠成像系統(tǒng)包括成像系統(tǒng)和分析凝膠圖片的軟件系統(tǒng)。在選購時(shí)需要分別從這兩個(gè)部分來考察凝膠成像系統(tǒng)的功能參數(shù)。
如果您主要用它來拍普通核酸膠或蛋白膠,那么幾乎市場上所有的成像儀都可以很好的滿足您的需求。這時(shí)除了價(jià)格這個(gè)決定因素外,能比較的也就是一些操作是否簡便等不太重要的指標(biāo)了。
但是對于準(zhǔn)備做化學(xué)發(fā)光的用戶,他們需要對敏感度要求高,同時(shí)還要求比較寬的動(dòng)態(tài)范圍。因?yàn)橐氩东@到微弱的化學(xué)發(fā)光,需要上佳的CCD相機(jī)和鏡頭。
一般來說,CCD相機(jī)的冷卻溫度和背景噪音息息相關(guān),溫度越低,噪音就越低。因此,-25℃的絕對制冷溫度是對相機(jī)的第一個(gè)要求(更低的溫度,噪音降低效果不明顯,而量子效率又會(huì)受很大影響);另外,較大的像素能夠提供更高的捕光效率;所以對于相同大小的CCD芯片,需要注意像素的尺寸。
鏡頭的參數(shù)就簡單了,由于我們只需要觀察近距離的樣品,而且一般可以調(diào)整樣品位置(有些廠家甚至提供電動(dòng)樣品升降平臺(tái)),所以基本無需選擇長鏡頭或者變焦鏡頭;但是,由于我們需要檢測微弱的化學(xué)發(fā)光,鏡頭的光圈則至關(guān)重要,一般F值越小,其通光量越大,而且成平方反比關(guān)系,因此我們一般需要選擇光圈F值盡量小的鏡頭。另外,如果鏡頭是電動(dòng)的,我們可以省卻打開機(jī)箱,反復(fù)手工調(diào)整光圈和聚焦等的煩惱。