熒光素酶發(fā)光成像的特點(diǎn)有哪些?
更新時(shí)間:2022-09-16 點(diǎn)擊次數(shù):887
活體動(dòng)物體內(nèi)光學(xué)成像主要采用生物發(fā)光與熒光兩種技術(shù)。生物發(fā)光是熒光素酶基因(Luciferase)標(biāo)記細(xì)胞或DNA,熒光技術(shù)則采用綠色熒光蛋白、紅色熒光蛋白等熒光報(bào)告基因和FITC、Cy5、Cy7等熒光素及量子點(diǎn)(quantumdot,QD)進(jìn)行標(biāo)記。
熒光素由于諸多優(yōu)點(diǎn)得到廣大科研人員的青睞,主要特點(diǎn)如下:
1.熒光素不會(huì)影響動(dòng)物的正常生理功能。
2.熒光素是280道爾頓的小分子,水溶性和脂溶性都非常好,很容易穿透細(xì)胞膜和血腦屏障。
3.熒光素在體內(nèi)擴(kuò)散速度快,可通過腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)。腹腔注射擴(kuò)散較慢,持續(xù)發(fā)光長(zhǎng)。熒光素腹腔注射老鼠后約1min后表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞開始發(fā)光,10min后強(qiáng)度達(dá)到穩(wěn)定的最高點(diǎn),在最高點(diǎn)持續(xù)約20~30min后開始衰減,約3h后熒光素排除,發(fā)光全部消失,最佳檢測(cè)時(shí)間是在注射后15~35min之間;若進(jìn)行熒光素靜脈注射,擴(kuò)散快,但發(fā)光持續(xù)時(shí)間很短??蒲腥藛T根據(jù)大量的實(shí)驗(yàn)總結(jié)出熒光素的合適的用量是150mg/kg,即體重20克的小鼠需要3毫克的熒光素。
4.觀察時(shí)間的間隔沒有最短限制,只要觀察的條件控制一致就可以。雖然底物在動(dòng)物體內(nèi)有一定的代謝過程,但是上一次底物的殘留曲線可以知道,可以控制對(duì)下一次觀察結(jié)果的影響。